Вирус группы оспы - вакцины

  В дальнейшем исследования в лаборатории развивались по двум основным взаимосвязанным направлениям: использование вируса осповакцины в качестве вектора для создания живых генноинженерных вакцин и изучение структуры и функции генома ортопоксвирусов.

  Совместно с сотрудниками института биохимии и физиологии микроорганизмов и Института общей генетики АН СССР разработана и получена сухая оспенно-гепатитная В вакцина. В рамках исследований по изучению структуры и функций генома поксвирусов впервые в мире получены рекомбинанты вируса осповакцины и эктромелии, обладающие "двойной" патогенностью.

  С 1961 г. начало работу производственное отделение антирабической вакцины. Вначале отделением выпускалась антирабическая вакцина Ферми. В 1963 г. создана лаборатория антирабических вакцин. В тесном содружестве лаборатории и отделения проводились исследования по усовершенствованию технологии приготовления выпускаемых препаратов и созданию новых вакцин.

  Впервые в мировой практике была создана безаллергенная вакцина из мозга новорожденных крысят и налажен выпуск такого препарата. В последующем была получена вакцина из мозговой ткани овец, инактивированная этанолом. Препарат использовался в ветеринарной практике.

  Активно проводились исследования по приготовлению культуральной концентрированной вакцины из штамма МИВП.

  Разработан и приготовлен высокоиммуногенный и более безопасный препарат - инактивированная очищенная вакцина из мозговой ткани овец.

  Вакцина включена в "Общесоюзный план внедрения важнейших достижений науки в практику здравоохранения на ХII пятилетку" (на 1987 г.).

  Расширение исследований по созданию профилактических противовирусных препаратов вызвало необходимость организации лаборатории, занимающейся их испытанием и внедрением в практику. В созданной в 1958 году лаборатории эпидемиологии, затем в 1963 году переименнованной в лабораторию по испытанию новых препаратов, под руководством проф. Унанова С.С. проводилось квалифицированное изучение экспериментальных серий всех вновь разрабатываемых в МНИИВП вакцин (полиомиелитной, энцефалитной, оспенной, гриппозной, антирабической, коревой, паротитной и др.), а также апробация различных методов их введения. Результаты, полученные при испытании штаммов-кандидатов для гриппозных вакцин, учитывались Комиссией по гриппозным вакцинным штаммам при рекомендации в практику новых штаммов. Лаборатория испытания новых препаратов принимала активное участие в проведении эпидопытов, а также в государственных испытаниях под руководством ГИСК им. Л.А. Тарасевича при изучении новых вакцин. Сотрудники лаборатории оказывали большую помощь практическому здравоохранению, участвуя в комплексных мероприятиях совместно с Московской Гор. и Обл.СЭС, Воронежской ОблСЭС и Краснодарской КрайСЭС, направленных на снижение заболеваемости ряда вирусных инфекций (корь, паротит, грипп).

  Сотрудниками лаборатории разработаны критерии оценки социального ущерба от кори и паротита и методика по определению экономической эффективности вакцинопрофилактики этих инфекций, изучены и внедрены в практику здравоохранения отечественные безыгольные инъекторы (БИ-1, БИ-2, БИ-3 и БИ-4).

  В результате научных исследований в лаборатории разработаны критерии оценки противовирусных вакцин с помощью иммунологических тестов, позволяющих получить объективную оценку эффективности препаратов и характеристику иммунного статуса человека в процессе становления и формирования поствакцинального и постинфекционного иммунитета.

  На протяжении всех лет работы института особое внимание уделялось научным исследованиям по культивированию клеток. В 1962 г. был создан музей перевиваемых линий. Коллекция состояла из 35 клеточных линий различного видового происхождения. В составленном в МНИИВП каталоге были представлены наиболее часто используемые виды перевиваемых клеток с тщательно охарактеризованными морфологическими и цитогенетическими свойствами, указан спектр чувствительности к вирусам. С помощью иммунологических методов проведена видовая идентификация всех клеточных линий, входивших в коллекцию клеточных культур института. В лаборатории проводилась большая работа по освоению прогрессивного метода культивирования клеток и вирусов на микроносителях различного типа.

  В лаборатории гибридных клеточных культур (ранее лаборатории клеточных культур) разработан оригинальный способ обработки микроносителей на основе сефадексов, позволяющий успешно культивировать любые типы клеток, независимо от их поверхностного заряда. В системе микроносителей ДЕАЕ - сефадекс А-50 и первичной культуры клеток японских перепелов изучена репродукция вакцинных штаммов вирусов кори, паротита, бешенства. В лаборатории разработан способ культивирования клеток животного происхождения, обеспечивающий получение клеточной популяции с повышенной пролиферативной активностью и чувствительностью к вирусам.

  Испытаны 2 типа микроносителей отечественного производства для выращивания первичной культуры клеток эмбрионов японских перепелов и выбран лучший из них.

  В лаборатории получили развитие исследования по созданию гибридных клеточных линий - гибридомной технологии, позволяющей получать в большом количестве моноклональные антитела с заданной специфичностью. В лаборатории созданы панели гибридом, продуцирующие моноклональные антитела к антигенам вируса гриппа А, кори, к вирусу оспы обезьян, альфа-интерферонам человека из лимфобластоидной линии Намальва. Паспортизированы 25 гибридом.

 В институте успешно проводились исследования по получению и изучению диплоидных клеток человека и животных - перспективных моделей для изучения взаимодействия вирусов и клеток, изучения влияния физико-химических и биологических факторов на генетический аппарат клетки. Был получен отечественный штамм диплоидных клеток, депонированный во Всесоюзной коллекции клеточных культур.

  В 1969 г. организована лаборатория латентных вирусов. Поставленная перед лабораторией в тот период задача заключалась в разработке методов контроля клеточных субстратов, используемых для производства живых вирусных вакцин. В результате исследований показано, что японские перепела не контаминированы, в отличие от кур, вирусами лейкозно-саркоматозного комплекса, а также вирусами болезни Марека, Ньюкасла, инфекционного бронхита, ларинготрахеита и др. распространенными вирусами птиц. Это способствовало широкому внедрению культур клеток эмбрионов японских перепелов для производства живых вирусных вакцин. В начале 80-х годов, совместно с отделением коревой и паротитной вакцин был предложен новый субстрат - культуры клеток эмбрионов японских перепелов породы "Фараон" с более высокой репродуктивной активностью вакцинных штаммов вирусов кори и паротита и свободный от контаминации онкогенными и другими вирусами птиц.

  Создана уникальная система-носитель: культура клеток НЕр-2 - вирус клещевого энцефалита, проведено изучение свойств этих клеток и вирусов в процессе почти 20-летнего существования системы. Впервые была установлена интеграция вируса клещевого энцефалита с геномом клетки-хозяина в процессе персистенции. В лаборатории изучены системы различных видов клеток во взаимодействии с вирусами бешенства, краснухи, паротита, кори. Получены данные о разнообразных механизмах персистенции вирусов в клетках, а также выявлены закономерности, характеризующие феномен персистенции вирусов: способность вирусов к длительной персистенции в культурах клеток, влияние клетки-хозяина на становление и течение хронической инфекции и проявление свойств персистирующих вирусов, изменение ряда биологических и физико-химических свойств персистирующих вирусов (ослабление репликации и транскрипции персистирующего вирусного генома, снижение синтеза вирусных белков) и сохранение ими таких важных свойств как антигенность и иммуногенность. В результате исследования проведена классификация механизмов вирусной персистенции.

  С 1970 г. в институте работает группа электронной микроскопии, исследования которой проводились в 4 направлениях: изучение ультраструктуры культивируемых клеток; изучение морфологии вирионов и субвирионных структур; исследования взаимодействия вируса и клетки в условиях формирования острой инаппарантной и персистентной форм инфекционного процесса; исследование локализации вирусных белков с помощью иммуноэлектронных методов.

  Кроме того, электронная микроскопия использовалась как диагностический метод для выявления вирусов группы оспы в материалах из эндемичных по оспе регионов в процессе работы по программе глобальной ликвидации оспы. Осуществлялся также контроль на наличие вирусов-контаминантов и микоплазм в культурах клеток, используемых в производстве и в процессе научных разработок.  В лаборатории разработки методов выделения, очистки и концентрации биологически активных веществ, созданной в 1983 г. (впоследствии переименована в лабораторию биосинтеза иммуноглобулинов), одним из направлений исследований являлась разработка методов получения высокоспецифичных тест-реагентов, идентифицирующих классы и подклассы иммуноглобулинов мыши и человека. Эти тест-реагенты необходимы для выявления и количественного определения иммуноглобулинов в различных биологических жидкостях, для выявления и разделения иммунокомпетентных клеток, для определения изотипов, продуцируемых гибридомами моноклональных антител.

  Полученные в лаборатории антисыворотки к иммуноглобулинам М, G, А мыши и иммуноглобулинам М человека; моноспецифические антисыворотки к мю-, гамма,-, альфа- цепям иммуноглобулинов мыши и мю-цепям иммуноглобулина М человека; аффинноочищенные антитела к иммуноглобулинам М и G мыши и иммуноглобулину G человека использовались как в лабораториях института, а также предавались в научно-исследовательские институты АН СССР, АМН СССР, Минздрава СССР, Минздрава РСФСР по просьбам этих организаций. Лаборатория являлась единственной в стране, производящей антисыворотки к изотипам мышиных иммуноглобулинов и аффинноочищенные антитела к иммуноглобулинам человека.

  Проводившиеся в лаборатории исследования клеточных и молекулярных механизмов биосинтеза иммуноглобулинов были направлены на выяснение сложных процессов клеточных взаимодействий, клеточной пролиферации и дифференцировки при индукции иммунного ответа, роли различных поверхностных структур в запуске специфических и неспецифических иммунных реакций при ответе на бактериальные и вирусные антигены. Так была показана роль антигенсвязывающих клеток в образовании антигензависимых неспецифических иммуноглобулинов, установлены закономерности появления продуцентов антител и неспецифических иммуноглобулинов при иммунизации Т-зависимыми и Т-независимыми антигенами бактериальной, вирусной и синтетической природы. Разработаны новые методы выявления продуцентов антител к вирусам гриппа, бактериальному Ви-антигену и анатоксину стафилококка, системы индукции иммунного ответа "ин витро" на вирус гриппа и Т-независимые антигены.

  Основным направлением деятельности лаборатории серологических микрометодов, организованной в 1983 г., являлась разработка высокочувствительных и специфичных методов быстрой диагностики вирусных инфекций. В лаборатории были созданы иммуноферментные тест-системы для диагностики трех распространенных вирусных заболеваний: краснухи, кори и герпеса простого и впервые в стране разработана рентабельная технология изготовления многокомпонентных наборов для выявления антител к этим вирусам с использованием отечественного оборудования и реактивов. Эти препараты включены в "Общесоюзный план внедрения важнейших достижений науки в практику здравоохранения на ХII пятилетку". Разработана и утверждена нормативно-техническая документация на иммуноферментную тест-систему для выявления антигена вируса герпеса простого.

  Сотрудники лаборатории постоянно оказывают помощь организациям практического здравоохранения при определении этиологии наиболее сложных отдельных случаев или вспышек заболевания.

  Основной задачей созданной в 1985 г. лаборатории клонирования вирусных геномов, являлась разработка, на основе метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот тестов для диагностики ряда вирусных инфекций: гриппа, респираторно-синтициального вируса и др.

  За прошедшие с момента организации 2 года в лаборатории клонированы кДНК-зонды, специфические для вирусов гриппа А и В, синтезированы ДНК-зонды, специфические для респираторно-синцитиального вируса и вируса СПИД. Создан и испытан на практике усовершенствованный метод гибридизации нуклеиновых кислот с чувствительностью, достаточной для диагностики вирусов гриппа непосредственно в носоглоточным смывах.

  Историческая справка подготовлена на основе документа «Материалы к докладу директора института О.Г. Анджапаридзе на юбилейной научной конференции, посвященной 30-летию Московского научно-исследовательского института вирусных препаратов Минздрава СССР (январь 1987 г. ) ». 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Список  используемой литературы 
 

1. Микробиология: Учебник для студентов биологической специальностей вузов / М.В. Гусев,Л.А. Минеева. – 4-е изд.,стер. -  М.: Издательский центр «Академия»,2003.-464 с.

2.Практикум по  микробиологии. Под ред. Н.С. Егорова. Учебное пособие.М., Издательство Моск. Ун-та, 1976. 307 с. С ил. И предм. Указ.