Отчет по преддипломной практике при Правительстве Кыргызской Республики

    Х₂ = 5а₂, (2)

    где а₂ - количество общих сахаров, найденное по градуировочному графику, мг.

    За  окончательный результат испытания  принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

    Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать 0,5'%.

    4.4.3 Массовую долю сахарозы Х_г, %, вычисляют по формуле

    Х₃ = Х₂-Х₁. (3)

4. Массовую долю редуцирующих сахаров или сахарозы в процентах на безводное вещество вычисляют умножением массовой доли редуцирующих сахаров (сахарозы) в меде в процентах на коэффициент:

    где W'-- массовая доля воды в меде, %.

    5.Определение диастазного числа

    Метод основан на колориметрическом определении  количества субстрата, расщепленного в условиях проведения ферментативной реакции, и последующем вычислении диастазного числа.

    Диастазное  число характеризует активность амилолитических ферментов меда.

    Диастазное  число выражают количеством кубических сантиметров раствора крахмала массовой долей 1 %, которое разлагается за 1 ч амилолитическими ферментами, содержащимися в 1 г безводного вещества меда.

1. см³ раствора крахмала соответствует 1 единице активности.

5.1 Аппаратура и реактивы

• - Колориметр фотоэлектрический, снабженный светофильтром максимумом пропускания при длине волны 582 или 590 нм.
• рН-метр с ценой деления 0.1 рН по НД.
• Электрод измерительный стеклянный.
• Баня-термостат водяная на 20 и 40 °С.
• Пробирки стеклянные диаметром 20 мм и высотой 200 мм по ГОСТ 25336.
• Весы "лабораторные 1-го или 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
• Бюретка вместимостью 25 см³ ценой деления 0,1 см³ по ГОСТ 29252.
• Пипетки исполнений 1, 2, 4, 5 и 6 вместимостью 1, 2 и 5 см³, 2-го класса точности по ГОСТ 29228.
• Колбы мерные исполнений 1, 2 вместимостью 50 см³ по ГОСТ 1770.
• Секундомер по НД,.
• Крахмал растворимый для йодометрии по ГОСТ 10163, ч., раствор массовой долей 0,25 %,
• Кислота  уксусная  ледяная  по ГОСТ 61, х.ч., раствор концентрации с (СН₃СООН) = 0,2 моль/дм³.
• Натрий уксуснокислый трехводный по ГОСТ 199, х.ч., раствор концентрации с (CH₃COONa)= 0,2 моль/дм³.
• -Натрий хлористый по ГОСТ 4233, ч.д.а., раствор концентрации с (NaCl) = 0,1 моль/дм³.
• 2,4-динитрофенол, ч.д.а. по НД.
• Йод, раствор концентрации 0,015 моль/дм³ по НД.
• Раствор буферный стандартный с рН, близкой к 5,0 для проверки стеклянного электрода по ГОСТ 8.135.
• Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

    5.2 Подготовка к испытанию

    5.2.1 Приготовление ацетатного буферного раствора

    Ацетатный буферный раствор концентрации 0,2 моль/дм³ с рН 5,0 готовят, смешивая одну объемную часть раствора уксусной кислоты и три объемные части раствора уксуснокислого натрия. В полученном буферном растворе растворяют 2,4-динитрофенол с таким расчетом, чтобы его концентрация в комбинированном реактиве составила 0,05 %. Проверяют рН раствора потенциометрически и в случае отклонений от рН 5,0 показатель корректируют, добавляя раствор уксусной кислоты концентрации 0,2 моль/дм³ или раствор уксуснокислого натрия концентрации с (СН₃ COONa) = 0,2 моль/дм³.'

    5.2.2 Приготовление комбинированного реактива

    Комбинированный реактив готовят из восьми объемных частей раствора крахмала, пяти объемных частей буферного раствора с 2,4-динитрофенолом и одной объемной части раствора хлористого натрия.

    При приготовлении комбинированного реактива в количестве, равном или большем 1 дм³, объем соответствующих растворов отмеривают с погрешностью не более 0,5 см³.

    Полученную  смесь тщательно встряхивают.

    Комбинированный реактив хранят при комнатной температуре не более 3 мес.

    5.2.3. Приготовление раствора меда

    5 г меда, извещенного с погрешностью не более 0,01 г, растворяют в дистиллированной воде is мерной колбе вместимостью 50 см³. 1 см³ такого раствора содержит 0,1 г меда.

    5.2.4. Приготовление раствора крахмала

    0,25 г крахмала, взвешенного с погрешностью  не более 0,001 г, размешивают  в стаканчике вместимостью 50 см³ с 10 - 20 см³ дистиллированной воды и количественно переносят в коническую колбу, где не сильно кипит 80 - 90 см³ дистиллированной воды.

    Кипение продолжается 2--3 мин. Колбу охлаждают до 20 °С, содержимое количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки.

    5.3 Проведение испытания

    В сухую пробирку отмеряют из бюретки 14,0 см³ комбинированного реактива. Пробирку закрывают резиновой пробкой и помещают на 10 мин в водяную баню при температуре 40 "С. Затем в пробирку вносят пипеткой 1,0 см³ раствора меда. Содержимое перемешивают пятикратным перевертыванием, и пробирку вновь помещают на водяную баню, одновременно включая секундомер. Пробирку выдерживают на водяной бане в течение 15 мин при температуре (40 ± 0,2) "С.

    Пипеткой  отбирают 2,0 см³ реакционной смеси, вносят ее при перемешивании в мерную колбу вместимостью 50 см³, содержащую 40 см³ воды и 1 см³ раствора йода, температурой 20°С. Раствор доводят водой до метки. Колбу закрывают пробкой, содержимое хорошо перемешивают и выдерживают на водяной бане при 20°С в течение 10 мин.

    Одновременно  проводят контрольный опыт, заменяя  раствор меда дистиллированной водой.

    Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре против воды при светофильтре длиной волны 582 или 590 нм, используя кювету рабочей длиной 1,0 см. Колориметрируя растворы, определяют значения оптической плотности испытуемого раствора D_исп и контрольного опыта D_к, с точностью отсчета 0,001.

    5.4 Обработка результатов

    Диастазное  число меда Х₄ в пересчете на 1 г безводного вещества вычисляют по формуле:

    где D_K - оптическая плотность раствора, определенная контрольным опытом;

    D _исп -оптическая плотность испытуемого раствора;

    80 - коэффициент пересчета;

    W- массовая доля воды в меде, %.

    За  окончательный результат испытания  принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,5 ед. Готе в интервале от 0 до 10 ед.

    6. Качественная реакция на оксиметилфурфурол

    Метод основан на образовании в кислой среде соединения оксиметил фурфурола  с резорцином, окрашенного в вишнево-красный цвет.

    6.1 Материалы и реактивы

    Ступки  фарфоровые диаметром 70 мм с пестиком по ГОСТ 9147.

    Чашки фарфоровые диаметром 50 мм по ГОСТ 9147.

    Эфир  для наркоза стабилизированный  по НД.

    Резорцин  по ГОСТ 9970.

    Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., концентрированная.

    6.2 Подготовка к испытанию

    6.2.1 Приготовление раствора резорцина массовой долей 1 %.

    1 г резорцина растворяют в 100 см³ концентрированной соляной кислоты. Раствор должен быть бесцветным. Раствор хранят в прохладном месте в склянке из оранжевого стекла с притертой пробкой.

    6.3 Проведение испытания

    В сухой фарфоровой ступке тщательно  перемешивают пестиком в течение 2-3 мин около 3 г меда и 15 см³ эфира. Эфирную вытяжку переносят в сухую фарфоровую чашку и повторяют перемешивание меда с новой порцией эфира. Эфирные вытяжки объединяют и дают эфиру испариться под тягой при температуре не выше 30 "С. К остатку прибавляют 2-3 капли раствора резорцина.

    Появление розового или оранжевого цвета в  течение 5 мин свидетельствует о  наличии оксиметилфурфурола. Быстрое исчезновение появившегося розового окрашивания в расчет не принимается.

    7. Определение оксиметилфурфурол а (ОМФ)

    Метод основан на колориметрическом определении  ОМФ в присутствии барбитуровой кислоты и паратолуидина.

    7.1 Аппаратура, материалы и реактивы

    Колориметр  фотоэлектрический, снабженный светофильтром  максимумом пропускания при длине  волны (540 ± 10) нм.

    Весы  лабораторные рычажные 1-го или 2-го класса точности по

 ГОСТ 24104.

    Баня  водяная на 50 - 60°С.

    Часы  песочные на 1 мин по НД.

    Электроплитка по ГОСТ 14919 или газовая горелка.

    Термометр ртутный стеклянный лабораторный до 100°С по ГОСТ 28498.

    Колбы мерные исполнений 1, 2, вместимостью 50, 100 см³, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

    Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см³ по ГОСТ 25336.

    Пробирки  стеклянные с притертой пробкой  вместимостью 10 см³ по ГОСТ 25336.

    Пипетки исполнений 1, 2, 4, 5, 6 вместимостью 1, 2, 5, 10 см³ по ГОСТ 29228.

    Барбитуровая  кислота по НД.

    Пара-толуидин по НД.

    Изотгоопанол  по ГОСТ 9805.

    Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х.ч.

    Вода  дистиллированная по ГОСТ 6709, освобожденная  от кислорода путем кипячения.

    Калий железистосинеродистый по ГОСТ 4207, х.ч.

    Сульфат цинка кристаллогидрат семиводный по ГОСТ 4174, х.ч.

    Фильтровальная  бумага по ГОСТ 12026.

    7.2 Подготовка к испытанию

    7.2.1 Приготовление раствора,барбитуровой кислоты

    500 мг барбитуровой кислоты, высушенной при 105°С в течение 1 ч, с 70 см³ дистиллированной воды переносят в колбу вместимостью 100 см³, растворяют при нагревании в водяной бане, охлаждают до 20°С и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят в холодильнике не более 1 мес. В случае образования кристаллов раствор нагревают на водяной бане примерно до 60°С до полного растворения кристаллов. Колба должна быть закрыта легко вынимаемой пробкой,

    7.2.2 Приготовление раствора пара-толуидина

    10 г пара-толуидина растворяют в  50 см³ изопропанола при температуре

    44-45°С на водяной бане, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, добавляют 10 см³ ледяной уксусной кислоты при перемешивании и при 20°С доводят изопропанолом до метки. Раствор используют через 24 ч после приготовления, хранят в прохладном и темном месте не более 1 мес.

    7.2.3 Приготовление реактива Керреса

    15 г гексацианоферрата калия растворяют  в дистиллированной воде в  колбе вместимостью 100 см³.

    20,4 г сульфата цинка кристаллогидрата  растворяют в дистиллированной  воде в колбе вместимостью 100 см³.

    7.2.4 Приготовление раствора меда

    (10,0.0 ± 0,01) г меда растворяют приблизительно в 20 см³ свежепрокипяченной и остывшей дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³. Мутные растворы просветляют реактивом Керреса. Для этого в колбу добавляют одну каплю гексацианоферрата калия, перемешивают, добавляют одну каплю сульфата цинка и при 20°С доводят водой до метки. Перемешивают и отфильтровывают через фильтровальную бумагу. Раствор используют немедленно.

    7.3 Проведение испытания

    В две чистые сухие пробирки наливают но 2 см³ раствора меда и 5 см³ пара-толуидина. В одну пробирку добавляют 1 см³ дистиллированной воды (контроль), перемешивают и содержимым этой пробирки заполняют кювету толщиной слоя раствора 1 см. Не позднее чем через 1-2 мин во вторую пробирку прилипают I см³ барбитуровой кислоты, перемешивают и заполняют вторую кювету.