Питательные среды для определения ферментации углеводов

Министерство образования и  науки Республики  Казахстан

 

Костанайский  государственный университет им. А.Байтурсынова

 

Кафедра ветеринарной санитарии

 

 

 

 

 

                                  

                                   

 

 

 

                                       Доклад

  на тему «Питательные среды для определения ферментации углеводов»

 

 

                                  

                   

                                        Дисциплина      Лабораторное дело

                      Специальность  5В120200 – Ветеринарная санитария

 

 

 

 

              

 

                                                                 Выполнила: Гумерова А.Р., студентка 2 курса

                                                                                        очной формы обучения, 14гр.

 

                                                                 Руководитель: Орынтаева М.Д.

 

 

 

 

 

                                                                        

                                                         Костанай, 2012

 Введение.

Питательные среды — субстраты, используемые в лабораторной практике для выращивания микроорганизмов и других биологических объектов. Рост микроорганизмов зависит от наличия в питательной среде достаточного количества органических и неорганических веществ в виде различных солей, витаминов и др. Питательные среды  должны обладать также оптимальными физико-химическими свойствами: рН, вязкостью, влажностью, осмотическими свойствами. 
Наиболее часто в качестве органического компонента питательных сред применяют продукты частичного расщепления белков — пептоны или различные мясные настои и экстракты. Эти компоненты используют при изготовлении многих так называемых обычных питательных сред, чаще всего применяемых для выращивания микробных культур, а также являющихся основой более сложных питательных сред. К числу обычных питательных сред относится мясо-пептонный бульон и бульон Хоттингера. В зависимости от вида культивируемого микроорганизма общие питательные среды содержат добавки различных бактериальных факторов роста. В одних случаях это могут быть чистые витамины, аминокислоты, в других — экстракты всевозможных натуральных субстратов.

 

РЕЦЕПТЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТАЦИИ УГЛЕВОДОВ .

К 100 мл дистиллированной воды прибавляют 1 г пептона, 0,5 г  хлорида натрия. Пептон и соль растворяют при нагревании воды в течение нескольких минут, фильтруют через бумажный фильтр так, чтобы раствор был совершенно прозрачным, устанавливают рН 7,0—7,4, прибавляют 0,5—1 г одного из необходимых углеводов (лактоза, глюкоза, сахароза, маннит и т. д.), а затем индикатор Андреде в количестве 1 мл на 100 мл среды или 0,1 мл 1,6% раствора индикатора бром-тимолового синего. Готовую среду разливают по 3 мл в пробирки, простерилизованные вместе с поплавками, расположенными запаянным концом кверху. Среду стерилизуют текучим паром З дня подряд по 30 или 20 мин при температуре 112°С. Во время стерилизации поплавки заполняются доверху питательной средой. Основой сред, применяемых для определения ферментации углеводов, является пептонная вода. Мясной бульон для этой цели непригоден, так как он содержит различные углеводы, что может привести к получению неправильных результатов. Среды Гисса с индикатором Андреде имеют соломенно-желтый цвет, с индикатором бромтимоловым синим—болотно-зеланый (рН 7,0—7,2). В результате роста бактерий, сопровождающегося расщеплением углевода с образованием кислых продуктов распада, цвет среды изменяется: в первом случае она приобретает ярко-розовый цвет; во втором — желтый. Образование газа в среде определяют по наличию пузырьков газа, собирающихся в поплавке. 45. Среды Гисса с сывороткой крови .К готовым средам Гисса добавляют 10—30% стерильной лошадиной сыворотки.

Для контроля сыворотки выдерживают в течение 3 дней в термостате. Среды Гисса на сыворотке Стерильную лошадиную сыворотку разводят стерильной дистиллированной водой (1:5), прогревают в текучепаровом аппарате при температуре 100°С в течение 30 мин. Прибавляют 0,5% углеводов (глюкоза, мальтоза или сахароза), устанавливают рН 7,6 и прибавляют 1 мл 1% водного раствора кислого фуксина на 100 мл среды, разливают по пробиркам и стерилизуют при температуре 100°С 3 дня подряд в течение 10 мин. Приготовленная среда почти бесцветна. Перед употреблением ее выдерживают для проверки на стерильность в термостате в течение 2 сут.

При расщеплении  углеводов с образованием кислоты  среда краснеет и сыворотка свертывается. Срок наблюдения над изменением среды 2—3 сут. Среды Гисса с крахмалом Обычный картофельный крахмал в количестве 25 г несколько раз промывают теплой дистиллированной водой для удаления растворимых частиц. Затем заваривают 500 мл горячей дистиллированной воды и отстаивают. Надосадочный слой крахмальной воды сливают для дальнейшего использования.

Отдельно готовят пептонно- сывороточную воду: растворяют 5 г. пептона и 1 г. двузамещенного фосфата натрия в 1250 мл, дистиллированной воды, добавляют 250 мл. лошадиной сыворотки, устанавливают рН 7,6. Крахмальную воду (325 мл) смешивают с 1250 мл пептонно-сывороточной воды, к смеси прибавляют 40 мл 0,02% спиртового раствора фенолового красного и все кипятят в водяной бане в течение часа, затем фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 мл. и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Приготовленная среда имеет насыщенно розовый цвет. Результат ферментации крахмала учитывают через 3 сут. после произведенного засева культуры. При расщеплении крахмала цвет среды изменяется в желтый и она свертывается.