Автор работы: Пользователь скрыл имя, 12 Апреля 2012 в 20:45, контрольная работа
В состав группы пневмовирусов входят респираторно-синцитиальный вирус человека, респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота и вирус пневмонии мышей. Прототип этой группы, респираторно-синцитиальный вирус, - это плеоморфный оболочечный вирус, геном которого представлен несегментированной РНК негативной полярности. РСВ принадлежит роду Pneumovirus, который вместе с родами Paramyxovirus и Morbillivirus образует семейство Paramyxoviridae.
1. УНИКАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПНЕВМОВИРУСОВ
1.1 ОБЩЕЕ ВВЕДЕНИЕ
1.2 НОМЕНКЛАТУРА
1.3 ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА
1.4 ХРАНЕНИЕ ВИРУСА
2. ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ
2.1 КУЛЬТИВИРОВАНИЕ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА
2.1.1 ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК
2.1.2 ЦИТОПАТОГЕННОЕ ДЕЙСТВИЕ
2.1.3 МЕТОДЫ ПОВЫШЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОЕ ™
2.1.4 МЕТОДЫ СТАБИЛИЗАЦИИ ИНФЕКЦИОННОЕ
2.2 МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОСТИ
2.3 ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ
2.4 ГЕМАДСОРБЦИЯ
2.5 ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ
2.6 ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
3.1 РАДИОАКТИВНОЕ ЛЕЧЕНИЕ, РАДИОИММУНОАНАЛИЗ И РАДИОИММУНОПРЕЦИПИТАЦИЯ
3.1.1 ВВЕДЕНИЕ РАДИОАКТИВНОЙ МЕТКИ В ВИРУСНЫЕ БЕЛКИ В ЗАРАЖЕННЫХ РСВ КЛЕТКАХ
3.1.2 РАДИОИММУНОАНАЛИЗ
3.1.3 РАДИОИММУНОПРЕЦИПИТАЦИЯ
3.2 МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ДЕФЕКТНЫХ ИНТЕРФЕРИРУЮЩИХ ЧАСТИЦ
3.3 ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
3.3.1 МОРФОЛОГИЯ ВИРИОНОВ
3.3.2 МОРФОГЕНЕЗ ВИРИОНОВ
3.3.3 СКАНИРУЮЩАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ
3.3.4 ЛОКАЛИЗАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ ПО СВЯЗЫВАНИЮ СТАФИЛОКОККОВ
3.4 КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ВИРУСА
3.5 ОЧИСТКА И РАДИОАКТИВНОЕ МЕЧЕНИЕ РСВ
3.5.1 ГРАДИЕНТНОЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
3.5.2 ОЧИСТКА РСВ МЕТОДОМ ИЗОПИКНИЧЕСКОГО ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ
3.6 РАДИОАКТИВНОЕ МЕЧЕНИЕ ВИРИОННОЙ РНК
3.7 АНАЛИЗ ВИРУСНЫХ РНК И БЕЛКОВ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ
3.7.1 АНАЛИЗ БЕЛКОВ
3.7.2 АНАЛИЗ РНК
3.8 ОЧИСТКА МАТРИЧНОЙ РНК ДЛЯ ТРАНСЛЯЦИИ
3.9 МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ И ОЛИГОНУКЛЕОТИДНОЕ СЕКВЕНИРОВАНИЕ
3.10 ОЧИСТКА ВИРУСНЫХ БЕЛКОВ
3.10.1 ВИРУСНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ
3.10.2 ОЧИСТКА КАПСИДНОГО БЕЛКА
3.10.3 ОЧИСТКА ВИРИОННЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ
4. СПЕЦИАЛЬНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
4.1 ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
4.2 ВЫДЕЛЕНИЕ ТЕМПЕРАТУРНО-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ МУТАНТОВ
4.3 ПОЛУЧЕНИЕ ПЕРСИСТЕНТНО ИНФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР
Температурно-
Как
и для остальных вирусов с
негативной полярностью РНК и
несегментированным геномом, рекомбинация
между температурно-
Персистентной инфекции культур клеток при полном отсутствии ЦПД или минимальном его проявлении можно добиться несколькими способами. Одним из них является пассирование вируса с высокой множественностью инфекции и пересев выживающих клеток. Другие методы включают заражение частично устойчивых клеток в присутствии противовирусных антител или интерферона. Для получения персистентно инфицированных культур можно инкубировать клетки, зараженные температурно-чувствительными мутантами РСВ при частично ограничивающей размножение температуре для подавления ЦПД. Такие культуры после установления персистенции поддерживают при той же температуре. Исход опыта зависит от конкретных свойств используемого мутанта. Температурно-чувствительные мутанты комплементационной группы В, продуцирующие при неразрешающей температуре лишь небольшое количество антигена, не подходят для данной цели, поскольку дают либо абортивную, либо литическую инфекцию. С другой стороны, мутанты группы D, синтезирующие при неразрешающей температуре значительное количество антигена, воспроизводимо дают персистентно инфицированные культуры, которые можно пассировать неограниченное число раз. Персистентно инфицированные культуры служат хорошим источником вирусного антигена для проведения анализа по методу ELISA.