Прокариотная клетка. Особенности строения прокариотной клетки

Во всех описанных выше путях переноса веществ через  ЦПМ они поступают в клетку в химически неизмененном виде. У прокариот известны системы транспорта, с помощью которых осуществляется поступление в клетку ряда сахаров, при этом процесс их переноса через мембрану сопровождается химической модификацией молекул. Так происходит, например, поступление в клетки многих прокариот молекул глюкозы, в процессе которого они фосфорилируются.

Внутрицитоплазматические  мембраны, прокариот

Выше были отмечены различия между прокариотной и эукариотной клетками в отношении их мембранных систем Отсутствие у прокариот типичных органелл, т. е. структур, полностью отграниченных от цитоплазмы элементарными мембранами, -- принципиальная особенность их клеточной организации.

В клетках разных групп  прокариот обнаружены мембраны, построенные  по принципу элементарной, иные, нежели ЦПМ. Строение, химический состав и  функции наружной мембраны грамотрицательных эубактерий описаны ранее. Имеющиеся данные говорят о том, что наружную мембрану можно рассматривать как мембрану другого типа, отличного от ЦПМ. Это касается конкретных аспектов ее строения и функционирования, но не основного принципа организации. Однако наружная мембрана относится к поверхностным структурам клетки эубактерий.

Среди внутрицитоплазматических мембран выделяют несколько видов (табл. 2). Развитая система внутрицитоплазматических мембран характерна для большинства фотосинтезирующих эубактерий. Поскольку было показано, что в этих мембранах локализован фотосинтетический аппарат клетки, они получили общее название фотосинтетических мембран. Все фотосинтетические мембраны (как и все внутриклеточные) -- производные ЦПМ, возникшие в результате ее разрастания и глубокого впячивания (инвагинации) в цитоплазму.

У некоторых организмов (пурпурные  бактерии) фотосинтетические мембраны сохранили тесную связь с ЦПМ, легко обнаруживаемую при электронно-микроскопическом изучении ультратонких срезов клетки. У цианобактерий эта связь менее очевидна. Одни авторы считают, что связь фотосинтетических мембран с ЦПМ у цианобактерий всегда существует, но трудно выявляется, поскольку редко попадает в плоскость среза препарата. По другому мнению, фотосинтетические мембраны цианобактерий -- структуры, возникшие первоначально из ЦПМ, но впоследствии отделившиеся от нее и являющиеся в настоящее время автономными клеточными компонентами.

Таблица 2

Мембраны прокариот

Прокариоты	Физиологические группы	Мембраны
		наружная клеточная	цитоплазматическая	внутрицито-плазматические
				фотосинтетические	мезосомальные	прочие
Грам положительные	хемотрофы	-	+	-	±	±***
Грам отрицательные	фототрофы	±*	+	±**	±**	-
	хемотрофы	±*	+	-	±	±****

*Отсутствует у архебактерий, клеточная стенка которых построена из белковых субъединиц и не окрашивается по Граму.

**Отсутствуют у зеленых  бактерий, цианобактерии Gloeobacter violaceus и экстремально галофильных архебактерий.

***Есть у некоторых  метанобразующих архебактерий.

**** Сильно развиты у нитрифицирующих, некоторых азотфиксирующих, метанокисляющих бактерий.

Внутрицитоплазматические  мембраны фотосинтезирующих эубактерий могут иметь вид трубочек, пузырьков (везикул, хроматофоров) или уплощенных замкнутых дисков (тилакоидов), образованных двумя тесно сближенными мембранными пластинами (ламеллами) (см. рис. 2). Система фотосинтетических мембран очень пластична. Ее морфология и степень развития в клетке определяются многими факторами внешней среды (интенсивностью света, концентрацией кислорода, снабжением клетки питательными веществами), а также возрастными характеристиками культуры.

У прокариот, принадлежащих к разным группам, описаны локальные впячивания ЦПМ, получившие название мезосом (см. рис. 2). Хорошо развитые и сложно организованные мезосомы характерны для грамположительных эубактерий. У грамотрицательных видов они встречаются значительно реже и относительно просто организованы.

Мезосомы различаются размерами, формой и локализацией в клетке. Выделяют три основных типа мезосом: ламеллярные (пластинчатые), везикулярные (имеющие форму пузырьков) и тубулярные (трубчатые).

Часто можно наблюдать  мезосомы смешанного типа, состоящие из ламелл, трубочек и пузырьков.

По расположению в клетке различают мезосомы, образующиеся в зоне клеточного деления и формирования поперечной перегородки (септы), мезосомы, к которым прикреплен нуклеоид, и мезосомы, сформированные в результате инвагинации периферических участков ЦПМ.

Существуют разные точки  зрения относительно роли мезосом в клетке. Согласно одной из них мезосомы не являются обязательной структурой, а служат только для усиления определенных клеточных функций, увеличивая общую "рабочую" поверхность мембран. Получены данные о том, что с мезосомами связано усиление энергетического метаболизма клеток. Мезосомы играют роль в репликации хромосомы и ее последующем расхождении по дочерним клеткам, участвуют в процессе инициации и формирования поперечной перегородки при клеточном делении. Для некоторых грамположительных бактерий обнаружено участие мезосом в секреторных процессах.

Высказывается также предположение, что мезосомы не принимают активного участия в процессах клеточного метаболизма, но выполняют структурную функцию, обеспечивая компартментализацию прокариотной клетки, т. е. пространственное разграничение внутриклеточного содержимого на относительно обособленные отсеки, что создает более благоприятные условия для протекания определенных последовательностей ферментативных реакций. Одновременное существование различных гипотез относительно роли мезосом в прокариотной клетке уже указывает на то, что их функции продолжают оставаться неясными.

Сильно развитая система  внутрицитоплазматических мембран, морфологически отличающихся от мезосомальных, описана у представителей трех групп грамотрицательных хемотрофных эубактерий (азотфиксирующих, нитрифицирующих и метанокисляющих), для которых показаны высокая активность дыхания, а также способность метаболизировать растворенные в жидкой среде газообразные соединения.

Цитозоль и рибосомы

Содержимое клетки, окруженное ЦПМ, называется цитоплазмой. Фракция  цитоплазмы, имеющая гомогенную консистенцию и содержащая набор растворимых  РНК, ферментных белков, продуктов и  субстратов метаболических реакций, получила название цитозоля. Другая часть цитоплазмы представлена разнообразными структурными элементами: внутрицитоплазматическими мембранами (если они есть), генетическим аппаратом, рибосомами и включениями разной химической природы и функционального назначения.

Рибосомы -- место синтеза белка -- рибонуклеопротеиновые частицы размером 15 - 20 нм. Их количество в клетке зависит от интенсивности процессов белкового синтеза и колеблется от 5000 до 90 000. Общая масса рибосом может составлять примерно 1/4 клеточной массы, а количество рибосомальной РНК (рРНК) -- 80 - 85 % всей бактериальной РНК. Отношение рРНК/белок в рибосомах Е. coli составляет 2:1, у других прокариот оно может быть несколько сдвинуто в сторону преобладания белка. Рибосомы прокариот имеют константу седиментации 705, отчего получили название 70S-частиц. Они построены из двух неодинаковых субчастиц: 305- и 50S-субъединиц (Обозначения 30S, 50S, 70S -- константы седиментации, характеризующие скорость, с которой эти частицы осаждаются в центрифуге при определенных стандартных условиях).

30S-частица содержит одну  молекулу 16S-рРНК и в большинстве  случаев по одной молекуле  белка более 20 видов. 50S-субъединица  состоит из двух молекул рРНК (235 и 55). В ее состав входят более 30 различных белков, также представленных, как правило, одной копией. Большая часть рибосомальных белков выполняет структурную функцию.

Синтез белка осуществляется агрегатами, состоящими из рибосом, молекул  информационной и транспортных РНК  и называемыми полирибосомами, или полисомами. Последние могут находиться в цитоплазме или же быть связанными с мембранными структурами.

 

Генетический аппарат  и репликация хромосомы

Рис. 14

Строение ДНК

А -- фрагмент нити ДНК, образованной чередующимися остатками дезоксирибозы и фосфорной кислоты. К первому углеродному атому дезоксирибозы присоединено азотистое основание: 1 -- цитозин; 2 -- гуанин; Б -- двойная спираль ДНК: Д -- дезоксирибоза; Ф -- фосфат; А -- аденин; Т -- тимин; Г -- гуанин; Ц -- цитозин

Строение генетического  аппарата прокариот долгое время  было предметом жарких дискуссий, суть которых сводилась к тому, есть у них такое же ядро, как у эукариот, или нет. Установлено, что генетический материал прокариотных организмов, как и эукариотных, представлен ДНК, но имеются существенные различия в его структурной организации. У прокариот ДНК представляет собой более или менее компактное образование, занимающее определенную область в цитоплазме и не отделенное от нее мембраной, как это имеет место у эукариот. Чтобы подчеркнуть структурные различия в генетическом аппарате прокариотных и эукариотных клеток, предложено у первых его называть нуклеоидом в отличие от ядра у вторых.

При электронно-микроскопическом наблюдении видно, что нуклеоид прокариот, несмотря на отсутствие ядерной мембраны, довольно четко отграничен от цитоплазмы, занимает в ней, как правило, центральную область и заполнен нитями ДНК диаметром около 2 нм. Не исключено, что на выявляемую в электронном микроскопе организацию прокариотной хромосомы большое влияние оказывают условия фиксации препарата. По имеющимся наблюдениям, в живой клетке нуклеоид занимает больше места в цитоплазме.

Вся генетическая информация прокариот содержится в одной  молекуле ДНК, имеющей форму ковалентно замкнутого кольца и получившей название бактериальной хромосомы (В прокариотной клетке ДНК может находиться и вне бактериальной хромосомы -- в плазмидах, но последние не являются обязательными клеточными компонентами).

Длина молекулы в развернутом  виде может составлять более 1 мм, т. е. почти в 1000 раз превышать длину  бактериальной клетки. Длительное время  считали, что в распределении  нитей ДНК бактериальной хромосомы  не прослеживается никакой закономерности. Однако если исходить из того, что молекула ДНК образует беспорядочный клубок, трудно объяснить процесс репликации и последующее распределение  образовавшихся хромосом по дочерним клеткам. Специальные исследования показали, что хромосомы прокариот  представляют собой высокоупорядоченную  структуру, имеющую константу седиментации 1300 - 2000S для свободной и 3200 - 7000S для  связанной с мембраной формы. В том и другом случае часть  ДНК в этой структуре представлена системой из 20 - 100 независимо суперспирализованных петель. В обеспечении суперспирализованной организации хромосом участвуют  молекулы РНК.

 

Рис. 15

Репликация кольцевой  бактериальной хромосомы в двух направлениях

А -- родительская молекула ДНК; Б -- промежуточные репликативные формы;

В -- дочерние молекулы ДНК после завершения процесса репликации и расхождения: 1 -- точка начала репликации; черными стрелками показано направление репликации.

Хромосомы большинства прокариот  имеют молекулярную массу в пределах 1 - 3 x 10⁹ Да. В группе микоплазм генетический материал представлен молекулами, имеющими наименьшее для клеточных организмов количество ДНК (0,4 - 0,8 x 10⁹), а наибольшее содержание ДНК обнаружено у нитчатых цианобактерий (8,5 x1 0⁹).

Хотя каждая прокариотная клетка содержит 1 хромосому, часто в экспоненциально растущей культуре количество ДНК на клетку может достигать массы 3, 4, 8 и более хромосом. Нередко в клетках при действии на них определенных факторов (температуры, pH среды, ионизирующего излучения, солей тяжелых металлов, некоторых антибиотиков и др.) происходит образование множества копий хромосомы. При устранении воздействия этих факторов, а также после перехода в стационарную фазу в клетках, как правило, обнаруживается по одной копии хромосомы.

ДНК прокариот построена  так же, как и эукариот (рис. 14). Молекула ДНК несет множество  отрицательных зарядов, поскольку  каждый фосфатный остаток содержит ионизированную гидроксильную группу. У эукариот отрицательные заряды нейтрализуются образованием комплекса ДНК с основными белками -- гистонами. В клетках подавляющего большинства прокариот не обнаружено гистонов, поэтому нейтрализация зарядов осуществляется взаимодействием ДНК с полиаминами (спермином и спермидином), а также с ионами Mg 2+. В последнее время у некоторых архебактерий и цианобактерий обнаружены гистоны и гистоноподобные белки, связанные с ДНК. Содержание пар оснований А+Т и Г+Ц в молекуле ДНК является постоянным для данного вида организма и служит важным диагностическим признаком. У прокариот молярная доля ГЦ в ДНК колеблется в очень широких пределах: от 23 до 75 %.

Рис. 16 Механизм распределения  бактериальных хромосом

А -- бактериальная клетка содержит частично реплицированную хромосому, прикрепленную к мембране в точке (или точках) репликации.

Б -- репликация хромосомы завершена. В бактериальной клетке две дочерние хромосомы, каждая из которых прикреплена к ЦПМ. Показан синтез клеточной стенки и ЦПМ.

В -- продолжающийся синтез мембраны и клеточной стенки приводит к разделению дочерних хромосом. Показано начало деления клетки путем образования поперечной перегородки: 1 -- ДНК; 2 -- прикрепление хромосомы к ЦПМ: 3 -- ЦПМ; 4 -- клеточная стенка: 5 -- синтезированный участок ЦПМ; 6 -- новый материал клеточной стенки.

Деление молекулы ДНК (репликация) происходит по полуконсервативному  механизму и в норме всегда предшествует делению клетки. С помощью  электронного микроскопа установлено, что репликация ДНК начинается в  точке прикрепления кольцевой хромосомы  к ЦПМ, где локализован ферментативный аппарат, ответственный за репликацию. Часто можно обнаружить, что контакт  ДНК с ЦПМ осуществляется посредством  мезосом. Репликация, начавшаяся в точке прикрепления, идет затем в двух противоположных направлениях, образуя характерные для кольцевой хромосомы промежуточные структуры (рис. 15).

Возникающие дочерние хромосомы  остаются прикрепленными к мембране. Репликация молекул ДНК происходит параллельно с синтезом мембраны в области контакта ДНК с ЦПМ. Это приводит к разделению (сегрегации) дочерних молекул ДНК и оформлению обособленных хромосом (рис. 16).

Модель строения бактериальной  хромосомы должна объяснять также  прохождение в клетке процессов  транскрипции и трансляции. Согласно существующим представлениям суперспирализованные петли соответствуют неактивным в данное время участкам ДНК и  находятся в центре нуклеоида. По его периферии располагаются деспирализованные участки, на которых происходит синтез информационной РНК (иРНК), при этом, поскольку у бактерий процессы транскрипции и трансляции идут одновременно, одна и та же молекула иРНК может быть одновременно связана с ДНК и рибосомами (рис. 17).