Флуориметрия

     В данном исследовании мы руководствовались  тем, что многие флуоресцирующие  металлорганические соединения являются хелатами металлов. Они часто состоят  из одного иона металла, который соединяется  с одной или несколькими молекулами хелатообразующего органического  соединения и дает жесткую структуру, содержащую несколько систем конденсированных колец, окружающих атом металла. В этом случае атом металла не содержит более  низких незаполненных атомных орбиталей  и ведёт себя подобно «инертному органическому атому». Таким образом, он является частью общей циклической  системы молекулы. Нами исследовалась  возможность образования флуоресцирующих комплексов салициловой кислоты со следующими катионами: Al³⁺, Zn²⁺, Mg²⁺

     Опыт  проводился с использованием 10% спиртовых  растворов салициловой кислоты  и 1% водных растворов солей каждого  из катионов.

     При подкислении раствора салициловой  кислоты наиболее яркую флуоресценцию наблюдали с катионом А1³⁺, ацетилсалициловая кислота подобной реакции не дала.

     1.4 Поиск флуоресцентных реакций на кверцетин

     Кверцетин, являясь аглюконом рутина, в результате несовершенства технологических процессов  всегда находится в рутине. Государственная  фармакопея X издания допускает не более 5% кверцетина в рутине.

     Была  исследована возможность образования  флуоресцирующих хелатов с солями:

     Al³⁺, Zn²⁺, Mg²⁺.

Нами обнаружено, что кверцетин в отличие от рутина дает флуоресцентную реакцию  с солями цинка, что связано с  образованием прочного 5-членного кольца с участием 3-оксигрупп. В случае рутина, наличие рамнозы как заместителя  в 3 положении из- за стерических  причин и отсутствия водорода не позволяет  образовывать флуоресцирующее соединений в этом положении. Как установлено  нами, рутин не дает с солями цинка  окрашенных соединений.

     Установлена возможность определения кверцетина в присутствии 1000 кратного количества рутина, а, следовательно, существует возможность  отличия флавонов со свободной 3-оксигруппой  от флавонов, содержащих в этой группе достаточно объемные заместители или  ее отсутствие.

     Методика  определения

     Точную  навеску 0,1 г препарата или мелкоизмельченных  таблеток растворяют в 10 мл этанола. К 9 мл данного раствора прибавляют 1 мл 2% спиртового раствора хлорида алюминия, перемешивают и флуориметрируют  при возбуждении флуоресценции 355 нм и излучении 410 нм относительно стандартного раствора салициловой кислоты. Для  чего в ряд пробирок прибавляют по 0,1; 0,3; 0,5;0,8 и 1 мл стандартного спиртового раствора салициловой кислоты с  содержанием 100 мкг/мл, по 1 мл 2% спиртового раствора хлорида алюминия, прибавляют этанола до 10 мл, перемешивают и флуориметрируют  одновременно с испытуемыми растворами. Расчет содержания салициловой кислоты  проводят по калибровочному графику.

     Содержание  салициловой кислоты в ацетилсалициловой  и салициловой кислоты в таблетках  представлены в таблице№1.

     1.5 Флуориметрическое определение кверцетина в лекарственных формах рутина

     Методика  определения

     Точную  навеску 0,1 г. препарата или мелкоизмельченных  таблеток переносят в мерную колбу  вместимостью 100 мл, прибавляют 70-80 мл ДМФА, энергично встряхивают 1 мин. Затем  прибавляют ДМФА до метки (раствор А). К 1 мл раствора А прибавляют 8 мл ДМФА, 1 мл 1 % раствора ацетата цинка в ДМФА, перемешивают и флуориметрируют относительно стандартного раствора кверцетина, для чего в ряд пробирок прибавляют 0,1; 0,3; 0,5; 0,8 и 1 мл стандартного раствора кверцетина в ДМФА с содержанием 100 мкг/мл, по 1 мл 1% раствора ацетата цинка в ДМФА, прибавляют ДМФА до 10 мл, перемешивают и флуориметрируют с максимумом возбуждения при 472 нм и излучении при 522 нм одновременно с испытуемыми растворами.

     Расчет  содержания кверцетина проводят по калибровочному графику.

     Содержание  кверцетина в рутине и рутина в  таблетках представлены в таблице№ 1.

     1.6 Флуориметрическое определение 2-амино-4-окси-6- птеридинкарбоновой кислоты в лекарственных формах фолиевой кислоты

     Методика  определения

     0,1 г (точная навеска) препарата  или мелкоизмельченных таблеток  переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 70-80 мл хлороформа  и встряхивают 2 мин. Затем прибавляют  хлороформа до метки. К 1 мл  данного раствора прибавляют 8 мл  ДМФА, 1 мл 0,1% раствора ацетата цинка  в ДМФА, перемешивают и флуориметрируют  при возбуждении флуоресценции  370 нм и излучении 420 нм относительно  стандартного раствора 2-амино-4-окси-б-птеридинкарбоновой  кислоты. Для чего в ряд пробирок  прибавляют 0,1; 0,3; 0,5; 0,8 и 1 мл стандартного  раствора 2-амино-4-окси-6-птеридинкарбоновой  кислоты в ДМФА с содержанием  20 мкг/мл, по 1 мл 0,1%) раствора ацетата  цинка в ДМФА, прибавляют ДМФА  до 10 мл, перемешивают и флуориметрируют  при 380/420 нм одновременно с  испытуемыми растворами.

     Расчет  содержания 2-амино-4-окси-6-птеридинкарбоновой кислоты в фолиевой кислоте и  в ее таблетках представлены в  таблице№1. 

Литература

1. Алексковский В.В. Бардин Н.В. Физико-химические методы анализа - Л.: Химия, 1971.-424 с.
2. Новиков Д.А., Новиков 0.0., Хабаров А.А. Дополнительный детектор для

флуориметрии. // Актуальные вопросы медицины и фармации: Тез. науч. конф. - Курск. 1996. - С. 130.

3. Новиков Д.А., Новиков 0.0., Хабаров А.А. Способ дополнительного детектирования в флуоресцентном анализе. // Актуальные проблемы медицины и фармации: Тез. науч. конф. - Курск. 1997. - С. 183.
4. Новиков Д.А., Хабаров А.А. Бесстандартный метод определения в

флуоресцентном  анализе. / Методические рекомендации. - Курский госмедуниверситет. - 1997. - 9 с.

5. Бабилев Ф.В. Применение Люминесценции в фармацевтическом анализе. - Кишинев: "Штница", 1977. - 120 с.
6. Бабко А.К. и др. Физико - химические методы анализа - М.: Высшая школа, 1968, 335 с.
7. Новиков Д.А., Хабаров А.А. Способ преодоления порога концентрационного тушения в фармацевтическом анализе./ Методические рекомендации. - Курский госмедуниверситет. -1997.- 10 с.
8. Давиденко Т.Д. Определение подлинности лекарственных веществ с использованием флуоресценции.// Современные проблемы фармации: Тез. респуб. науч. конф. - Алма -Ата. 1989. - С.28-30.
9. Будко Е.В. Флуоресценцтный анализ лекарственных соединений, содержащих фенольныый гидроксил: Дис....д - ра.фармац.наук. - Курск, 2001.- 321 с.
10. Голиков С.Н. и др. Общие механизмы токсического действия / С.Н.Голиков, И.В.Саноцкий, Л.А.Тиунов - Л.: Медицина, 1986. - 280 с.
11. Божевольнов Е.А. Люминесцентный анализ неорганических веществ - М.: Химия, 1966. - 416 с.
12. Болотовский Б.М. Свечение Вавилова - Черенкова. -М.: Наука, 1964. - С.73-75.