Возможности установления видовой специфичности биологических объектов при провдении экспертизы вещественных доказательств

 
 
 
 
 
 

РЕФЕРАТ 

Тема: “ВОЗМОЖНОСТИ УСТАНОВЛЕНИЯ ВИДОВОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ

БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЭКСПЕРТИЗЫ ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВ”. 
 
 

                                                                                                        Цикл:

                                                                                                      “Судебно-медицинская

                                                                                                        экспертиза” 

                                                                                                         ВЫПОЛНИЛА :

                                                                                                          Лаборант СМЭ

                                                                                                          Киберева В.Г.

                                                                                                          Куратор:

                                                                                                         Нестеров А.В. 
 
 

г.Хабаровск

2008г.

    СОДЕРЖАНИЕ 
 

    1.Введение  ………………………………………………………………..………3 
 

    2.Основная  часть………………………………………………………………….5 
 

    3.Заключение…………………………………………………………………….14 
 

    4.Список  литературы……………………………………………………………15 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

    ВВЕДЕНИЕ

    После выявления на вещественных доказательствах  следов крови или каких-либо частиц органов и тканей необходимо определить их вид, т.е. установить, принадлежит  ли кровь или эти частицы человеку или какому-нибудь животному.

    Необходимость проведения такого исследования, с  одной стороны, вызвана тем, что нередко обстоятельства происшествия позволяют предположить принадлежность крови на вещественных доказательствах не только человеку, но и животному, а с другой определением групповой принадлежности следов, которое нельзя проводить без предварительного установления их видовой принадлежности.

    Только  в 1899г. После открытия Ф.Я. Чистовичем видовой антигенной специфичности  сывороточных белков судебная медицина  получила научно обоснованный метод дифференцирования крови человека и животных.

    Основополагающие  работы в области видовой специфичности  в 1901г. Были опубликованы P.Uhlenhuth и до настоящего времени не утратили актуальность. В течение ряда лет различные исследователи вносили новые теоретические положения в природу видоспецифических антигенов. Естественно-научные основы видовых антигенов рассмотрены в статье М.Е.Потапова, Т.А. Куприной, Е.Р. Сигал (1985). Единый видоспецифический антиген (ВСА) обнаружен не был. Существуют множественные специфические антигенные детерминанты белков сыворотки крови. К каждому из которых могут быть изготовлены моноспецифические антифракционные гетероиммунные сыворотки. Такие сыворотки получены к альбумину, трансферрину, иммуноглобулинам и т.д. Каждую  из этих сывороток можно сделать видоспецифической. Невозможно получить сыворотку. Способную преципитировать любой белок сыворотки крови. ВСА содержится не только в крови, но и в тканях, органах, клетках, жидкостях и выделениях организма.

    Реакция преципитации является одной из реакций  иммунитета, при которой происходит взаимодействие антигенов и антител. При определении видовой специфичности  крови антигенами являются главным  образом сывороточные белки-альбумины  и глобулины, а антителами-иммунные глобулины преципитирующей сыворотки.

    Видовая специфичность присуща не только белкам крови, но и различным белковым субстанциям выделений – спермы, слюны, пота, мочи, выделений из носа, влагалища и т.д.

    В настоящее время все преципитирующие  сыворотки для судебно-медицинской экспертизы изготавливают путем иммунизации кроликов, в ряде случаев кур, коз и других животных. В настоящее время изготавливают сыворотки, способные преципитировать белки крови человека, рогатого скота, лошади, свиньи, собаки, кошки, птицы, кролика, лося. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

    ОСНОВНАЯ  ЧАСТЬ

    Реакция преципитации может осуществляться в нескольких вариантах:

    - реакция преципитации в жидкой  среде. Применяемые в реакции  преципитирующие сыворотки должны  быть прозрачными, не гемолизированными, иметь светло-желтый или желтый цвет. Титр сывороток должен быть равен 1:10000. Как правило, пригодны для реакции сыворотки, способные в течение 10 мин образовывать осадок при разведении антигена 1:1000.

    Обычно  перед выпуском сыворотки подвергают соответствующему контролю, однако их титр может снижаться. Это обязывает эксперта перед использованием в реакции преципитирующей сыворотки проверить ее титр и специфичность.

    Применять сыворотки с титром ниже 1:5000 не рекомендуется. Эксперт никогда не сможет установить причину отрицательного результата реакции: несоответствующая чувствительность реакции или отсутствие крови человека. Сыворотки с очень высоким титром применять во всех случаях также нецелесообразно, так как они могут выявить небольшое количество белка, содержащегося на вещественном доказательстве вне пятен крови. Это относиться к загрязненным предметам-носителям.

    Специфичными  считаются сыворотки, реагирующие  только с соответствующим белковым компонентом и не реагирующие  только с соответствующим белковым компонентом и не реагирующие с чужеродным белком в течение 1ч., при концентрации белка 1:1000.

    Приготовление вытяжек из пятен крови. Для приготовления  вытяжек из пятна крови вырезается небольшой участок, размер которого зависит от концентрации пятна, давности его происхождения, степени пропитанности и выраженности. Вырезанный участок пятна мелко нарезают и помещают в коническую пробирку. Материал заливают изотоническим раствором натрия хлорида с таким расчетом, чтобы он смочил материал и оставался в незначительном избытке. Таким же образом поступают с образцом с предмета-носителя, который всегда берут в непосредственной близости от исследуемых объектов. Ингредиенты перемешивают и экстрагируют при 4С в течение 1-2 суток. Если белки крови плохо растворимы, экстрагирование следует продолжать до 5-7 суток при тщательном каждодневном контроле прозрачности вытяжки. При малейших признаках помутнения жидкости экстрагирование прекращают, жидкость отсасывают, тщательно центрифугируют, а при необходимости фильтруют.

    Если  пятна крови находятся на не впитывающей  поверхности, то вытяжки готовят из соскобов пятен или путем перенесения их на влажную, смоченную изотоническим раствором натрия хлорида марлю. Для контрольных исследований используют соскоб, взятый в непосредственной близости от следа крови, либо влажную марлю, которой протирают места, незапятнанные кровью. В случае сильно загрязненных вещественных доказательств пятна крови и образец предмета-носителя не рекомендуется сильно измельчать, а при добавлении изотонического раствора натрия хлорида ингредиенты  не следует перемешивать.

    Р.Н.Капелович (1961), T.Marcinkowski (1960, 1962) считают, что во избежание помутнения жидкости лучше всего перенести ее на хроматогрофическую бумагу. Если не удается ликвидировать помутнения вытяжки, то проведение реакции преципитации в жидкой среде становиться невозможным. В этих случаях используют другие методы исследования, как, например, реакцию преципитации в твердой среде, электропреципитацию и т.д.

    Наибольшие  трудности при установлении видовой принадлежности представляет исследование трудно растворимых пятен крови. В которых под влиянием различных физических (высокая температура, ультрафиолетовое излучение, и д.р.) и химических (воздействие кислот, щелочей, ацетона, йода, формалина) факторов белковые вещества денатурируются. Типичной денатурацией можно считать и некоторые изменения, возникшие в белках в процессе старения пятна крови.

    В 1967 году Р.С.Сахаров предложил использовать для улучшения растворимости  протелин; в 1982 году С.Г.Бровина предложила в качестве растворителя протеазу животного происхождения – Трипсин. В настоящее время наиболее часто используется 0,1% раствор трипсина. Для приготовления 0,1% раствора трипсина берут 50мг. сухого трипсина и добавляют  физиологический раствор до 50м. Срок хранения раствора до 72 часов в холодильнике при температуре 4-8 *С. В течение этого времени трипсин не вызывает не специфических явлений при взаимодействии с преципитирующими сыворотками.

    Измельченный  исследуемый материал (объекты с кровью и предметы-носители) помещают в пробирки и заливают экстрагентом так, чтобы он хорошо пропитал весь материал и имелся небольшой избыток жидкости. Пробирки с залитым материалом закрывают ватными пробками и помещают в комнатный холодильник при 4-8*С. В большинстве случаев экстрагирование проводят в течении 24 часов. За это время в раствор переходит достаточное количество белков. При исследовании сильно измененных пятен крови срок экстрагирования может быть продлен до 48-72часов.

    Постановка  реакции. При каждом исследовании в реакцию вводят не менее трех преципитирующих сывороток для изучения вытяжки из объектов исследования, образцов предмета-носителя, изотонического раствора натрия хлорида, применяемого для экстрагирования, а также антигенов животных, белок крови которых преципитируют вводимые в реакцию сыворотки.

    Набор сывороток может быть различен. В  зависимости от поставленной задачи. Чаще всего в реакции используют сыворотку, преципитирующую белок  человека. Все остальные сыворотки  вводиться в зависимости от региона, обстоятельств дела и т.д. Исключение составляют случаи расследования хищений или убоя скота, в которых набор преципитирующих сывороток должен быть целенаправленным.

    В пробирку с соответствующей надписью помещают вытяжку из пятна крови, антиген, изотонический раствор натрия хлорида. В каждый объект исследования добавляют преципитирующую сыворотку с таким расчетом, чтобы отношение количества антигена и антитела составляло 1:10. Наблюдение ведут в течение часа, регистрируя в рабочем журнале продолжительность реакции и время появления преципитата.

    Положительным результатом реакции считается  выпадение осадков преципитата  в пробирках с вытяжками из пятен крови и в пробирках с антигенами (если сыворотки являются соответствующими) при отсутствии осадка в пробирках с вытяжкой из предмета-носителя и в пробирках с изотоническим раствором натрия хлорида.

    Если  преципитант образовался в пробирках  не только с вытяжкой из пятна крови, но и с вытяжкой из предмета-носителя, то видовая принадлежность не может считаться установленной. В этих случаях исследуют дополнительно несколько контрольных участков предмета-носителя, расположенных вокруг исследуемого пятна крови и в непосредственной близости от последнего.

    В ряде случаев могут образоваться осадки со всеми преципитирующими сыворотками. В таких случаях эксперт не может дать заключение о видовой принадлежности исследуемого объекта и указывает причину, не позволившую определить видовую принадлежность.

    Неспецифические явления могут наблюдаться и  при экстрагировании объектов физиологическим раствором. Наиболее часто они бывают обусловлены следующими причинами;

    1. Избыточной концентрации антигена, когда может наступить “феномен зоны – не выпадение осадка”

    2. Очень кислой реакцией. В избытке  кислоты преципитат растворяется и не дает специфического осадка.

    3. Наличие на предмете-носителе  дубильных веществ.

    4. Воздействие различных моющих  средств на белковые субстанции.

    Вагиной И.Н. (1986) было изучено действие моющих средств с биологическими добавками  на следы крови. В результате были сделаны следующие выводы:

    1. Определение видовой принадлежности  следов крови после воздействия  моющих средств без кипячения обеспечивается сохранением антигенных свойств альбуминов, трансферина, иммуноглобулинов.

     2. Видовые свойства сохранившихся белков не изменяются.