Алгоритми виконання практичних навичок з навчальної дисципліни «Мікробіології»

Мета:

Виділення чистої культури мікроорганізмів та її ідентифікація. Мікробіологічна діагностика інфекційних хвороб.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Взяття матеріалу слід здійснювати до вживання хворим антибіотиків та інших антимікробних препаратів, або після їх відміни через 2-3 доби. Характер і кількість матеріалу, який збирається, повинен бути скоригований з урахуванням клінічної картини, патогенезу, строків захворювання, його тяжкості тощо. Необхідно виключити можливість інфікування осіб, які беруть матеріал. Максимальне скорочення строків з моменту взяття матеріалу до його доставки у мікробіологічну лабораторію не більше ніж 2-3 години.

Під час відбору проб слід дотримуватися правил асептики та техніки безпеки, користуватись засобами індивідуального захисту - хірургічними халатами, гумовими рукавичками, масками, а в разі потреби - захисним екраном, непромокальними фартухами, нарукавниками, окулярами.

ОСНАЩЕННЯ:

- бікс;

- стерильний посуд  (банки, пробірки, флакони);

- стерильні інструменти  (тампони, шприци, шпателі, піпетки та ін.);

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- вата, пінцет;

- 70% етиловий спирт;

- ефір, ацетон;

- середовище для вірусів (ВТС);

- маркер;

- бланки направлень;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

Матеріал

Методи збору

Слиз з носа та ротоглотки

Стерильними тампонами

Патологічний матеріал із задньої стінки ротоглотки

Натще відбирають стерильним тампоном під кутом 135⁰ або через 3-4 години після їжі

Патологічний матеріал з вуха, виразки, абсцесу, рани

Стерильними тампонами

Спинномозкова рідина

В пробірки у кількості 1-2 см

Проби калу

Флакони з-під пеніциліну масою 8-10 г (розміром з кісточку сливи)

Стерильними ректальними тампонами

Промивні води шлунку

Стерильний посуд в об’ємі 50-100 см³

Дуоденальний вміст

У стерильні пробірки

Кров на вірусологічне дослідження

Беруть із вени в об'ємі 5-10 см³, краще під час гарячки

Кров на серологічне дослідження

Беруть із вени в об'ємі 3-5 см³ з інтервалом 12-14 діб. Першу пробу - на початку захворювання, другу - через 2-3 тижні

Кров на гемокультуру

З перших днів захворювання стерильним шприцом від 5 до 10 см³ біля ліжка хворого в асептичних умовах

Сеча

Збирають середню порцію в об'ємі 50 см³

Мазок із кон'юнктиви

Беруть сухим стерильним тампоном і вміщують в середовище для вірусів (ВТС)

Вміст везикул

Поверхню шкіри обробляють ефіром або ацетоном; вміст везикул відсмоктують шприцом і переносять в середовище для вірусів (ВТС)

Секційний матеріал

Шматочки тканин масою 1-3 г поміщають в окремі стерильні флакони

На санітарно-вірусологічне дослідження відбирають матеріал з довкілля (грунт, воду, молочні продукти, овочі, фрукти тощо)

Стерильний посуд

Мета:

Дотримання правил асептики, захист патологічного матеріалу  від забруднення сторонньою мікрофлорою, транспортування матеріалу на спеціальному транспорті або перенесення патологічного матеріалу в біксах, сумках-холодильниках, пластикових футлярах, термосах, максимальне скорочення строків транспортування матеріалу до лабораторії з моменту його взяття.

Виявлення патогенних мікроорганізмів у патологічному матеріалі для діагностики інфекційних хвороб.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

На мікробіологічне дослідження у хворих відбирають патологічний матеріал для діагностики інфекційних хвороб, у здорових – з метою профілактичного обстеження, та з навколишнього середовища – для виявлення патогенних мікроорганізмів або визначення його санітарного стану. Всі дані направлення використовують під час приймання матеріалу в лабораторію, під час проведення дослідження, проведення протиепідемічних заходів тощо.

ОСНАЩЕННЯ:

- бікс, контейнер, сумки-холодильники, термоса;

- патологічний матеріал;

- бланки направлень;

- олівець по склу;

- вата, грілки, поліетиленові  пакети;

- 70% етиловий спирт;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Обладнайте робоче місце.

Будь-який матеріал, що надходить на дослідження в бактеріологічну лабораторію, розглядається як потенційно небезпечний.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Оформіть супровідну документацію.

В направленні  до бактеріологічної лабораторії вказують:

- назву ЛПЗ;

- відділення, № палати;

- матеріал, мету дослідження;

- прізвище, ім’я та по батькові хворого, вік;

- адресу, діагноз, дату  захворювання;

- дату госпіталізації;

- дату і час забору  матеріалу;

- прізвище і посаду  особи, яка направляє матеріал для дослідження.

Всі пункти направлення  мають бути заповнені, тому що всі дані використовують при реєстрації матеріалу в лабораторії.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

До кожної проби додають етикетку, на якій 
вказують:

- номер і назву матеріалу;

- заклад, відділення або  його місце взяття;

- прізвище, ім’я та  по батькові хворого;

- дату взяття матеріалу.

2. Загальні вимоги до взяття і транспортування матеріалу:

- взяття матеріалу  слід здійснювати до лікування хворого, а після лікування через 2-3 доби;

- характер і кількість  матеріалу, який збирається, повинен бути скоригований з урахуванням клінічної картини, патогенезу, строків захворювання;

- необхідно виключить можливість інфікування осіб, яки беруть і доставляють матеріал, і забруднення довкілля мікробами;

- максимальне скорочення  строків з моменту взяття матеріалу до його доставки у мікробіологічну лабораторію не більше ніж 2-3 години;

- матеріал доставляється на спеціальному транспорті, або переноситься в біксах, сумках-холодильниках, контейнерах, термосах;

Направлення на дослідження  упаковують окремо.

3. Проведіть упаковку патологічного матеріалу.

ЗАБОРОНЯЄТЬСЯ обертати направлення навколо посудини, що є об’єктом дослідження.

При обстеженні на коклюш, менінгококову інфекцію матеріал, що вміщує мікроорганізми, нестійкі в навколишньому середовищі (збудники коклюшу, менінгококової інфекції), під час транспортування, обкладають ватою або грілками.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

Забезпечується інфекційна безпека.

Мета:

Визначати рід, вид, тип  збудника, виділеного із патологічного  матеріалу хворого, - серологічна ідентифікація культури мікроорганізмів.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Серологічні реакції  ґрунтуються на взаємодії антигену зі специфічним антитілом. Ці реакції високо специфічні, чутливі, їх широко використовують у лабораторній практиці. Реакція аглютинації на склі є завершальним етапом серологічної ідентифікації мікробних культур після попереднього їх вивчення за культуральними, морфологічними і ферментативними властивостями.

ОСНАЩЕННЯ:

- специфічна сироватка,  культура мікроорганізмів;

- спиртівка, сухий спирт, сірники;

- 70% етиловий спирт;

- бактеріологічна петля;

- предметні скельця;

- олівець по склу;

- ізотонічний розчин, склянка з дезінфекційним розчином;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Приготуйте:

- спиртівку, сухий  спирт, сірники

- бактеріологічну петлю

- предметне скло

- специфічну сироватку

- культуру мікроорганізмів

- склянку з дезінфекційним  розчином

- ізотонічний розчин

- олівець по склу

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Знежирте предметне скло, нанесіть маркером три кола діаметром близько 1 см на однаковій відстані одне від одного, скло переверніть.

2. Підпишіть: під І колом – Д (дослід), під ІІ – КС (контроль сироватки), під ІІІ – КА (контроль антигену), зазначте номер дослідження.

3. Запаліть спиртівку.

4. Зафламбуйте предметне скло, покладіть його у кришку чашки Петрі.

5. Нанесіть пастерівською піпеткою на кола Д і КС по 1 краплі аглютинуючої сироватки, на коло КА – 1 краплю ізотонічного розчину натрію хлориду.

6. Зафламбуйте бактеріологічну петлю.

Реакція між антигеном (культурою мікроорганізмів) і антитілом (специфічною сироваткою) відбувається в 2 фази.

Перша фаза – специфічна, в якій антиген з’єднується з  антитілом.

Друга фаза - утворення пластивців, внаслідок склеювання бактеріальних клітин.

РА на склі використовується для серологічної ідентифікації невідомих антигенів (бактерій, грибів, вірусів).

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

7. Розітріть і змішайте бактеріологічною петлею 
досліджувану культуру з краплею ізотонічного розчину натрію хлориду (КА).

8. Змішайте досліджувану культуру з краплею сироватки (Д).

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Через 1-3 хв. проведіть облік та оцінку результатів.

2. Оцінювання результату починають з контролів:

КА – рівномірне помутніння

КС – крапля прозора

У разі появи аглютината у колі Д на фоні прозорої рідини реакція позитивна (антиген відповідає антитілу).

У разі рівномірного помутніння у колі Д – реакція негативна (антиген не відповідає антитілу).

3. Помістіть предметне скло в дезінфекційний розчин.

4. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

Антитіла в РА називаються аглютинінами.

Антигени – аглютиногенами, а осад, який утворюється – аглютинат.

Дрібнозернистий осад утворюється нерухомими мікроорганізмами. Крупнозернистий осад утворюється рухомими мікроорганізмами.

Знижується ризик інфікування.