Примеси в лекарственных препаратах. Разработка методики определения примеси свободной салициловой кислоты в кислоте ацетилсалициловой

COONa         COOH     

салицилат           салициловая       

  натрия                 кислота

Салициловая кислота кристаллизуется бесцветными иголками, сладковато-кислого вкуса. Она довольно трудно растворима в холодной воде, легко в горячей воде и спирте. Ее водные растворы с хлорным железом дают характерное, очень интенсивное фиолетовое окрашивание.

3+                                                                                                                                     +

Fe   + 3 C6H4(OH)COOH  (C6H4(OH)COO)3Fe + 3 H

              Салициловая кислота - ингредиент многих веществ, в том числе фруктов (яблоки, виноград, апельсины, персики, сливы), входит в состав некоторых сортов мыла, ароматизирующих средств и напитков (особенно березового сока). Салициловая кислота применяется как консервант при изготовлении вин, овощных консервов, варенья, соков и т. д. При поступлении салициловой кислоты внутрь наблюдается раздражение слизистой оболочки желудка, появляются боль в надчревной области, тошнота, а иногда и рвота. Поэтому салициловая кислота не применяется внутрь. Во избежание этих нежелательных побочных реакций применяются соли салициловой кислоты (салицилаты) и ее производные, например аспирин. Так как салициловая кислота способна оказывать ульцерогенное действие, то нормирование предельно допустимого содержания ее как примеси в ацетилсалициловой кислоте жизненно необходимо.

Обзор методик определения примеси салициловой кислоты в ацетилсалициловой кислоте по фармакопеям разных стран.

              Для определения примеси свободной салициловой кислоты в ацетилсалициловой кислоте фармакопеи разных стран предлагают различные методики, совпадающие по пределам содержания.

              Государственная Фармакопея РФ XII издание предлагает методику определения салициловой кислоты с помощью спектрофотометрии, основанной на измерении оптической плотности раствора, содержащего ацетилсалициловую кислоту и стандартного раствора, содержащего стандартный образец салициловой кислоты (стандарт ВР или аналогичного качества).

              Международная Фармакопея (третье издание, том 2) предлагает сравнение исследуемого раствора с эталонным раствором стандартного образца салициловой кислоты, окраска исследуемого раствора не должна быть интенсивнее окраски стандартного раствора. При этом содержание салициловой кислоты не более 2,0 мг/г.

              Британская Фармакопея 1963 г. так же предлагает использовать метод сравнения с эталонным раствором, используя в качестве вещества, дающего окраску с салициловой кислотой раствор сульфата железа (III) аммония.

              Украинская Фармакопея предлагает для обнаружения примеси свободной салициловой кислоты использовать метод жидкостной хроматографии. Количество свободной салициловой кислоты в этом случае определяется по площадям пиков на хроматограмме. Этот метод является наиболее точным из всех вышеприведенных, но имеет и свои недостатки: дорогостоящая аппаратура, которая имеется на сегодняшний день не во всех лабораториях.

              Государственная Фармакопея СССР Х издание1968г предлагает так же использовать метод сравнения со стандартным раствором.

              Исходя из полученных данных по методам анализа ацетилсалициловой кислоты на содержание примеси салициловой кислоты в фармакопеях разных стран, мной был проведен анализ методик на основании условий, необходимых для проведения данных методов в лаборатории и сделан выбор методики определения примеси салициловой кислоты в ацетилсалициловой кислоте. Для проведения сравнения методик по следующим критериям: специфичность, чувствительность, воспроизводимость, скорость выполнения, минимальные экономические затраты и экологическая безопасность, мной были выбраны две методики: методика определения примеси свободной салициловой кислоты в ацетилсалициловой по Государственной Фармакопее СССР Х издание и методика, которую предлагаю непосредственно я для анализа примеси свободной салициловой кислоты в ацетилсалициловой кислоте методом фотоколориметрии. Экспериментальные данные позволят выявить оптимальный метод анализа ацетилсалициловой кислоты на содержание примеси свободной салициловой кислоты.

Фотоколориметрический метод.

              Фотоколориметрический метод анализа основан на измере­нии поглощения света немонохроматического излучения окра­шенными соединениями в видимой области спектра.

              Если исследуемые соединения бесцветны, их переводят в окрашенные соединения путем взаимодействия с различным реактивами. В этом случае окрашенные соединения в большин­стве своем являются комплексными или внутрикомплексными соединениями. Последние должны быть прочными, имея посто­янный состав, высокую интенсивность окраски.             

              В зависимости от способа измерения концентрации веществ в окрашенных растворах, от применяемой аппаратуры методы фотоколориметрического анализа подразделяются в основном на два вида: визуальные и фотоэлектрические.

              При визуальном методе, называемом колориметрическим, интенсивность окраски исследуемых растворов сравнивается с интенсивностью окраски стандартных растворов, в которых кон­центрация вещества известна.

              При фотоэлектрических методах анализа интенсивность ок­раски, т. е. погашение (А) окрашенного раствора исследуемого вещества, измеряют с помощью приборов — фотоэлектроколо­риметров (ФЭК) или спектрофотометра в видимой области спектра.

              Методы анализа, связанные с измерением поглощения света (спектрофотометрия, фотоколориметрия) базируются на объединенном законе Бугера — Ламберта — Бера, который уста­навливает зависимость между поглощающей способностью ис­следуемого раствора, концентрацией вещества этого раствора и толщиной поглощающего слоя.

              Согласно этому закону погашение (А) раствора прямо пропорционально концентрации раствора поглощающего вещества (С), толщине слоя (b) в сантиметрах и молярному или удель­ному показателю поглощения (х). Эта зависимость выражается формулой:             

А = х*b*c, откуда С =

              Основной принцип работы всех систем фотоэлектроколори­метров заключается в том, что световой поток определенного интервала длин волн, прошедший через кювету с окрашенным.

Рис. 1. Общий вид прибора КФК-2:

1 — осветитель; 2 — рукоятка ввода цветных светофильтров; 3 — кюветное отделе­ние; 4 — рукоятка перемещения кювет с раствором сравнения и исследуемым раствором; 5 — рукоятка (ввода фотоприемников в световой поток) «Чувствительность»; 6 — рукоятка настройки прибора на 100%-ное пропускание; 7 — микроам­перметр.

Порядок работы. 1. Включить прибор в сеть и прогреть 10 мин.

2.                   Установить светофильтр (№ 3).

3.                   В левый световой пучок на все время измерения ставится кювета с растворителем.

4.                   В правый пучок света помещается кювета с исследуемым раствором.

5.                   Правый барабан устанавливается на отсчет 100 по шкале коэффициента пропускания (А = 0).

6.                   Открыть шторку.

7.                   Вращением левого барабана уравнивают световые по­токи.

В правый пучок света помещают кювету с растворителем.

8.                   Вращением правого измерительного барабана уравнивают световые потоки.

9.                   По шкале правого барабана отсчитывают величину коэф­фициента пропускания или погашения.

10.                Зная величину погашения, по графику находят концент­рацию исследуемого раствора.

              Определение концентрации раствора. При определении концентрации вещества в растворе следует соблю­дать следующую последовательность в работе:

—                   выбор светофильтра;

—                   выбор кюветы;

—                   построение градуировочной кривой для данного веще­ства;

—                   измерение погашения исследуемого раствора и определе­ние концентрации вещества в растворе.

              Построение градуировочной кривой. Готовят ряд растворов стандартного образца1 данного вещества с из­вестными концентрациями, измеряют погашения всех растворов и строят градуировочную кривую, откладывая по горизонталь­ной оси (абсциссе) известные концентрации, а по вертикаль­ной (ординате) — соответствующие им значения погашения.

              По градуировочной кривой в дальнейшем определяют неиз­вестную концентрацию вещества в исследуемых растворах. Для этого раствор наливают в ту же кювету, для которой построена градуировочная кривая, и, включив тот же светофильтр, опре­деляют погашение. Затем по градуировочной кривой находят концентрацию, соответствующую измеренному значению пога­шения, градуировочную кривую следует время от времени про­верять. Характерным для фармацевтического анализа последних лет является применение в количественном анализе фармацевти­ческих препаратов таких методов, как фотометрия пламени, дифференциальная спектрофотометрия.

Метод дифференциальной спектрофотометрии значительно повышает точность спектрофотометрического и фотоколоримет­рического анализа лекарственных веществ.

              Этот метод дает возможность определять большие количест­ва отдельных компонентов смеси, так как погашение исследуе­мого раствора измеряется не относительно чистого растворите­ля (или раствора реактивов), а относительно раствора сравне­ния, содержащего известное количество определяемого веще­ства.

Под стандартным образцом («рабочий стандарт») подразумевается об­разец вещества, отвечающий всем требованиям ГФ X или другой норматив­но-технической документации (см. ГФ X, с. 808).

Глава 2.

Практическая часть

Материалы исследования.

              Для изучения был взят образец субстанции ацетилсалициловой кислоты (серия 20031383, поставщик «ГУП СО Фармация», производитель «Shandong Xinhua Pharmaceutical Factory», Китай), срок годности до 03.2004г.

Салициловая кислота производителя Rhodia Organique, Франция, серия 0202400, регистрационный номер 293-16/2622, срок годности до 01.2007г.

Используемые реактивы.

Азотная кислота концентрированная (ГОСТ 113-03-270-90);

Вода очищенная (ГФ Х, часть1, статья 73, стр. 107);

Индикатор фенолфталеин ( ТУ 6-09-5360-88 );

Квасцы железоаммониевые ( ГОСТ 4205-7);

Натра едкого раствор (ГОСТ 4328-77);

Спирт этиловый 96% (ГОСТ Р 51652-2000);

Оборудование.

Аналитические весы (0,0002) Typ WA – 31, № 74666;

Электронные весы (0,01) AND ELECTRONIC BALANCE, FX – 3200, SER 5304384;

Фотоэлектроколориметр КФК-2-УХЛ 4.2 № 8902125

              Цель практической работы: следует выполнить анализ содержания примеси свободной салициловой кислоты в 5-6 повторностях для возможности статистической обработки результатов. На основании статистической обработки провести сравнение методик и обосновать выбор более оптимальной методики для определения содержания примеси салициловой кислоты в ацетилсалициловой кислоте.

Метод № 1. Фармакопейный метод. (ГФ Х, ст.3)

              На электронных весах отвешивают навеску ацетилсалициловой кислоты 0,3г, растворяю в 5 мл спирта, отмеренного мерным цилиндром на 10 мл, и прибавляют 25 мл воды (испытуемый раствор). Выбирают два цилиндра одинакового объема, стекла и диаметра. В один цилиндр помещают 15 мл испытуемого раствора, в другой – 5 мл этого же раствора, 0,5 мл 0,01% водного раствора салициловой кислоты, 2 мл спирта и доводят водой до 15 мл (эталонный раствор). Затем в оба цилиндра добавляют по 1 мл кислого 0,2% раствора железоаммониевых квасцов. Окраска испытуемого раствора не должна быть интенсивнее эталонного раствора (не более 0,05% в препарате).